医疗器械网：荧光定量pcr检测技术无需内标-凯发平台app

    凯发平台app称 pcr检测技术已经广泛应用于医疗研究机构和生物技术研究领域，那么，pcr检测技术有哪些特点和技术要求呢？

    pcr即聚合酶链式反应（英文全称：polymerase chain reaction）。聚合酶链式反应（pcr）是体外酶促合成特异dna片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，通过凯发平台app循环进行，使目的dna得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有dna,rna的地方．聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，简称pcr）又称无细胞分子克隆或特异性dna序列体外引物定向酶促扩增技术。

1.实时荧光定量pcr无需内标
实时荧光定量pcr技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在软件之中，通过对每个样品ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。
1）ct值的重现性：pcr循环在到达ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的ct值是恒定的。
2）ct值与起始模板的线性关系：由于ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量pcr是一种采用外标准与标本同步进行核酸提取的曲线定量方法。
2．内标对实时荧光定量pcr的影响
若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则pcr反应变为双重pcr，双重pcr反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。正因如此，定量方法虽然加入内标，仍为一种半定量方法。
美国texas大学的酶标仪科研人员进行了外标法定量和内标法定量的方法学比较，得出的结论是：内标法作为定量或半定量的手段是不可靠的，而外标准曲线的定量方法是一种准确的、值得信赖的科学方法。
applied biosystems公司的7700型实时荧光定量pcr仪是全球公认的荧光定量pcr的金标准，可实现多色荧光同时检测，但定量检测仍然采用外标准曲线的方法，而不用内标进行定量。